用分光光度法測定土壤中的氨氮的含量

氨氮是指以游離氨和銨離子形式存在的氮。氨氮是土壤中一種重要的污染因子，對土壤中氨氮進行監測能夠掌握其污染狀況。本文參考《HJ634-2012 土壤 氨氮的測定 氯化鉀溶液提取-分光光度法》，應用分光光度法測定土壤中氨氮含量。

實驗準備

1.1方法原理

氯化鉀溶液提取土壤中的氨氮，在堿性條件下，提取液中的氨離子在有次氯酸跟離子存在時與苯酚反應生成藍色靛酚染料，在630nm波長具有大吸收。在一定濃度范圍內，氨氮濃度與吸光度值符合朗伯-比爾定律。

1.2儀器設備

1.3 試劑

除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為電導率小于0.2ms/m（25℃時測定）的去離子水濃硫酸ρ（H2SO4）=1.84g/ml二水檸檬酸鈉、二氯異氰尿酸鈉、氯化鉀、氯化銨、苯酚

1.4試劑配制

1.4.1 氯化鉀溶液（1mol/L）：稱取74.55g氯化鉀，用適量水溶解，移入1000ml容量瓶中，用水定容、混勻。

1.4.2 氯化銨標準貯備液（200mg/L）：稱取0.764g氯化銨（105℃下烘干2h），用適量水溶解，加入0.30ml濃硫酸，冷卻后移入1000ml容量瓶中，用水定容，混勻。該溶液在避光、4℃下可保存一個月。

1.4.3 氯化銨標準使用液（10mg/L）：量取5.0ml氯化銨標準貯備液于100ml容量瓶中，用水定容、混勻。用時現配。

1.4.4 苯酚溶液：稱取70g苯酚溶于1000ml水中。該溶液貯存于棕色玻璃瓶中，在室溫條件下可保存一年。

1.4.5 二水硝普酸鈉溶液：稱取0.8g二水硝普酸鈉溶于1000ml水中。該溶液貯存于棕色玻璃瓶中，在室溫條件下可保存三個月。

1.4.6 緩沖溶液：稱取280g二水檸檬酸鈉及22.0g氫氧化鈉，溶于500ml水中，移入1000ml容量瓶中，用水定容、混勻。

1.4.7 硝普酸鈉-苯酚顯色劑：量取15ml二水硝普酸鈉溶液及15ml苯酚溶液和750ml水，混勻。該溶液用時現配。

1.4.8 二氯異氰尿酸鈉顯色劑：稱取5.0g二氯異氰尿酸鈉溶于1000ml緩沖溶液中，4℃下可保存一個月。

實驗過程

2.1 標樣測定

分別量取0、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、3.50ml氯化銨標準使用液于一組100ml具塞比色管中，加水至10.0ml，制備標準系列。氨氮含量分別為0、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、35.0ug。

向標準系列中加入40ml硝普酸鈉-苯酚顯色劑，充分混合，靜置15min。然后分別加入1.00ml二氯異氰尿酸鈉顯色劑，充分混合，在15℃-35℃條件下只是靜置5h。于630nm波長處，以水為參比，測量吸光度。以扣除零濃度的校正吸光度為縱坐標，氨氮含量（ug）為橫坐標，繪制校準曲線。

2.2 樣品測定

將采集后的土壤樣品去除雜物，手工或儀器混勻，過樣品篩。在進行手工混合時應戴橡膠手套。過篩后樣品分為兩份，一份用于測定干物質含量，另一份用于測定待測組分含量。

稱取40.0g試樣，放入500ml聚丙烯瓶中，加入200ml氯化鉀溶液，在20±2℃的恒溫水浴振蕩器中震蕩提取1h。轉移約60ml提取液于100ml聚乙烯離心管中，在3000r/min的條件下離心分離10min。然后將約50ml上清液轉移至100ml比色管中，制得試料，待測。量取10.0ml試料至100ml具塞比色管中，按照標準曲線比色步驟測定吸光度。同時做空白試驗。

實驗結果

3.1 標準曲線方程

根據標樣測定方法測量各標樣的吸光度，繪制標準曲線方程如下：

3.2 樣品測定結果

根據《HJ634-2012土壤氨氮的測定氯化鉀溶液提取-分光光度法》和《HJ613-2011土壤干物質和水分的測定重量法》進行計算，該土壤氨氮含量為15.9mg/Kg。

3.3 回收率測定

在樣品中分別加入0.1ppm和0.2ppm的標準溶液，進行加標回收率實驗測定結果。

3.4 精密度測定

對樣品重復測試11次，得到相對標準偏差RSD為0.377%。